초록 (Abstract)
목적
FIP(전염성 복막염)이 의심되는 고양이에 대해 대부분 성공적인 가정 내 치료제로 사용되고 있는 비허가 GS-441524 유사 제품의 성분을 분석하는 것이 목적이다. GS-441524 외에도 렘데시비르 함량과 주사제의 pH도 측정하였다.
샘플
30개의 가장 인기 있는 암시장 브랜드에서 수집된 주사제 및 경구제 총 127개 샘플.
방법
기부를 통해 확보한 비허가 GS-441524 유사 제품에 대해 액체 크로마토그래피와 질량 분석법(LC-MS/MS)을 이용하여 GS-441524 및 렘데시비르 함량을 측정하였다. pH 측정기는 주사제의 pH를 측정하는 데 사용되었다.
결과
87개의 주사제 중 95%는 제조사가 표기한 농도보다 평균 39% 더 많은 GS-441524를 함유하고 있었다. 평균 pH는 1.30으로, 피하 주사에 권장되는 생리학적 pH보다 훨씬 낮았다. 경구제는 변동성이 더 컸으며, 43%는 예상보다 평균 75% 더 많은 GS-441524를 포함하고 있었고, 58%는 예상보다 평균 39% 적은 양을 포함하고 있었다. 주사제 샘플 간 GS-441524 함량의 변동성은 매우 낮았다(변동계수 기준). 주사제 1개, 경구제 2개에서는 추가적으로 렘데시비르가 검출되었다.
임상적 의의
이번에 시험된 모든 비허가 제품에는 GS-441524가 포함되어 있었다. 주사제는 일반적으로 표기된 양보다 더 많은 약물을 포함하고 있으며, pH는 생리적 수준 이하였다. 비허가 경구제는 약물 함량이 매우 다양하며, 비표준화된 복용법과 라벨링 문제를 안고 있다. 이 연구는 이러한 제품들에 대한 규제 필요성과 GS-441524의 합법적인 입수 경로 개발의 필요성을 강조한다.
키워드: 항바이러스제; 고양이 전염성 복막염; GS-441524; 비허가; LC-MS/MS
서론 (Introduction)고양이 코로나바이러스(FCoV)는 국내 고양이 개체군에 널리 퍼져 있으며, 두 가지 생물형(biotype)이 존재한다. 첫 번째는 고양이 장관 코로나바이러스(FECV)로, 일반적으로 비특이적이며 치명적이지 않은 증상을 유발한다. 그러나 문헌에서 아직 명확히 밝혀지지 않은 어떤 메커니즘에 의해 FCoV는 훨씬 더 치명적인 질병인 전염성 복막염(FIP)으로 전환될 수 있으며, 주로 생후 4~16개월 사이 고양이에서 가장 높은 발병률을 보인다.
정확한 진단은 신뢰할 만한 생전 진단검사(antemortem test)가 부족하여 어려우며, 현재 FDA 승인 치료제는 존재하지 않는다. 치료하지 않을 경우 거의 항상 치명적이다. 지난 5년간 항바이러스제 연구는 FIP로 진단된 고양이에 대해 유망한 결과를 보여주었다. 그 중 하나인 GS-441524는 실험적으로 유도되거나 자연 발생한 FIP 고양이에서 치료 효과를 보였다. GS-441524는 렘데시비르의 활성 대사체로, 렘데시비르는 2020년 COVID-19에 대해 FDA의 긴급사용 승인을 받은 바 있다. 현재 미국을 비롯한 대부분 국가에서는 수의사가 GS-441524를 합법적으로 처방할 수 있는 수단이 존재하지 않는다.
생명을 살릴 수 있는 치료제가 존재하지만 이를 합법적으로 구할 수 없다는 현실은 미국 내에서 GS-441524에 대한 전례 없는 수요를 만들어냈다. 온라인 정보와 “FIP Warriors” 같은 소셜미디어 커뮤니티는 수천 명의 보호자들이 거의 수의사의 감독 없이 해당 치료제를 확보하고 고양이에게 투여할 수 있도록 했다. 지금까지 이러한 비규제 제품들의 실제 성분이나 pH는 제조사의 라벨 정보와 비교 분석된 적이 없었다. 이 제품들의 내용물에 대한 불확실성은 수의사들이 FIP 치료에 관여하지 못하게 만드는 여러 이유 중 하나이다.
저자들은 ‘비허가(unlicensed)’라는 용어가 정확한 표현은 아닐 수 있다는 점을 인지하고 있다. 생물의약품의 허가는 USDA의 관할이지만, 본 사례의 의약품에는 적용되지 않기 때문이다. 이러한 전례 없는 보호자 중심의 수의학적 실천에서 발생하는 제품들을 지칭하는 적절한 용어는 아직 문헌에 존재하지 않지만, 기존 문헌에서 FIP용 암시장 항바이러스제를 언급할 때 사용된 ‘비허가(unlicensed)’라는 용어를 본 보고서에서도 사용하였다.
우리는 이 비허가 제품들이 실제로 GS-441524를 함유하고 있으며, 표기된 양보다 많은 함량을 포함하고 있을 것이라 가정하였다. 또한, 이 약물이 잘 녹기 위한 조건으로 인해 주사제의 평균 pH는 2.0 이하로 낮을 것이라고 추가로 가정하였다. 비록 이러한 치료는 감독이 거의 없지만, 비허가 GS-441524 제품을 사용한 가정 내 치료는 FIP로 진단된 고양이에게 효과적인 치료법으로 보고되고 있다. 이 연구 결과가 보호자들이 치료 계획을 더 잘 결정하고, FIP 고양이를 위한 윤리적이고 합법적인 치료제 개발을 촉진하는 데 도움이 되길 바란다. 또한, 어떤 제형이 보다 안전하고 효과적인지 이해함으로써 보호자와 수의사 모두가 보다 나은 선택을 할 수 있도록 돕고자 한다.
방법 (Methods)면책 조항 (Disclaimer)이 보고서는 미국 내에서 합법적으로 구할 수 없고, 블랙마켓을 통해서만 입수 가능한 제품들을 평가한다. 이 약물은 FDA의 승인을 받지 않았으며, 미국 내 합법적인 경로를 통해 상업적으로 이용할 수 없다.
샘플 수집 (Sample collection)흔히 사용되는 주사제 및 경구용 GS-441524 제형의 샘플은 소셜미디어를 통해 FIP 치료 커뮤니티로부터 모집되었다. 모든 샘플은 2022년 10월부터 12월 사이에 오하이오 주립대학교 수의과대학에 기부되었으며, 생산자로부터 직접 구매한 샘플은 없다. 수집 이후, 각 샘플의 GS-441524 및 렘데시비르 함량을 분석하기 위해 캘리포니아 대학교 데이비스캠퍼스 의과대학의 분자 약리학 공동 연구소로 샘플이 보내졌다. 주사제는 pH도 함께 측정되었다.
LC-MS/MS를 이용한 실제 GS-441524 함량 분석사용된 화학물질 — 렘데시비르(순도 > 99%, AdipoGen Life Sciences Inc), GS-441524(순도 > 99%, MedChemExpress), 중수소 표시 렘데시비르-D5(순도 > 99%, Acanthus Research Inc)가 기준 물질로 사용되었다. 분석 등급의 메탄올과 아세토니트릴(ACN)은 Thermo-Fisher Scientific Inc에서, 포름산 암모늄과 포름산은 Sigma-Aldrich에서 구매되었다. LC-MS/MS 분석 방법 — 초고속 액체 크로마토그래피 시스템(Prominence; Shimadzu Corp)과 질량 분석기(4000 QTRAP; AB Sciex)를 결합하여 정량 분석을 수행했다. 주사제 샘플: ACN/물(1:1, 부피비) 용액으로 20,000배 희석 후 15,700 X g로 4도씨에서 5분간 원심분리. 상등액 5μL를 직접 LC-MS/MS 분석에 사용. 정제 및 캡슐 샘플: 알약이나 캡슐 속 가루를 ACN/물(1:1) 용액으로 희석하여 1.0 mg/mL 농도로 만들고, 실온에서 100 rpm으로 1.5시간 흔들어 용해. 그 후 1mL를 15,700 X g로 10분간 4도씨에서 원심분리하고, 상등액을 0.22μm 필터로 여과 후 다시 1,000배 희석하여 5μL를 LC-MS/MS 분석에 사용.
이동상 구성: 질량분석(MS/MS) 조건: 양이온 모드 커튼 가스: 10 psi 네뷸라이저 가스: 20 psi 보조 가스: 20 psi 이온 스프레이 전압: 5,500V 온도: 500도씨
MRM 전이값 (질량/전하비, m/z): GS-441524: [M+H]+ 292.3 → 202.1 렘데시비르: [M+H]+ 603.4 → 402.3 내부 표준: [M+H]+ 608.6 → 407.2 유지 시간: GS-441524 - 2.78분, 렘데시비르 - 3.47분
보정곡선 범위 및 정밀도: GS-441524: 100~4,000 ng/mL 렘데시비르: 10~400 ng/mL 상관계수: 0.99 이상 정밀도: GS-441524(150, 500, 3,000 ng/mL), 렘데시비르(15, 50, 300 ng/mL)에서 모두 2.7% 이하 정확도: 90.0% ~ 106.7%
예상 GS-441524 함량 (Expected GS-441524 content)LC-MS/MS로 측정된 실제 함량은 샘플의 라벨 또는 제조사의 웹사이트에 표기된 예상 농도와 비교되었다. 경구제 샘플에는 정제와 캡슐이 포함되어 있으며, 표기 방식이 일관되지 않아 기대 함량을 계산해야 했다. FIP 치료 커뮤니티에서는 생산자가 생체이용률을 고려해 라벨에 약효 기준 용량을 표기하는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, “Brava 5mg”이라고 표시된 알약은 실제로 10mg의 GS-441524를 포함한다고 가정하였다. 10개 샘플: “Brava, Ocean, Rose, Valor” 등 라벨에 mg 단위 표기가 있었고, 실제 함량은 2배(50% 생체이용률 가정)로 계산됨. 6개 샘플: “actual mg/pill” 표기가 있어, 그대로 사용. 19개 샘플: 라벨이나 웹사이트에 복용 지침만 표기되어 있어, 이를 기반으로 예상 함량을 계산. 예: “1일 1정 / 체중 1kg” 또는 “1kg”라고만 표시된 경우.
현재 표준 치료 용량인 5mg/kg/day 기준으로 환산하고, 생체이용률 50%를 고려해 2배로 보정함. 예를 들어, “1kg”이라 적힌 알약은 5mg이 투여된다고 가정되며, 50% 생체이용률을 고려해 실제로는 10mg을 포함하는 것으로 추정하였다.
표 1 (Table 1)본 연구에서 시험된 경구 제형(oral formulations)이 나열되어 있다. 제품 설명란에는 라벨, 웹사이트 또는 기타 출처에서 확인된 알약의 내용물 또는 복용 지침에 대한 정보가 포함되어 있다. 라벨링 방식과 알약 식별 방식은 매우 다양했으며, 이 표의 해당 열에서 다양한 표현 방식이 강조되어 있다. 제품 설명을 바탕으로, 치료 지침(예: "1정/1kg"), 권장 용량 5 mg/kg/일, GS-441524의 약 50% 생체이용률을 고려하여 추정 GS-441524 함량을 계산하였다.
실제 함량은 액체 크로마토그래피-질량분석(LC-MS/MS) 방법을 통해 측정되었다.
특이사항 및 보정 내용Xraphconn 및 Mutian 정제의 유효성분은 MT-0901로 표기되어 있으나, 이전 연구에 따르면 실제로는 GS-441524로 확인되었다【5】. Xraphconn 50, 100, 200mg 정제는 각각 GS-441524의 2.5mg, 5mg, 10mg에 해당하는 용량을 의도한 것으로 추정되며, 생체이용률 50%를 고려해 다시 계산되었다【8,12】.
주사제에 대한 참고주사제의 경우 mg/mL 단위로 라벨링되어 있어 기대 GS 농도 계산이 상대적으로 명확하였다. 단, OM 브랜드의 주사제 1개는 경구제와 유사하게 복용 지침을 기준으로 함량을 추정하였다.
pH 측정
통계 방법Excel 1808 버전(Microsoft Corp) 사용 기대값 대비 실제 GS-441524 함량의 백분율 차이, 평균, SD 계산 복제 샘플 간 변동성은 CV(변동계수)로 평가됨 → SD를 평균 대비 백분율로 표현 **2표본 짝지은 t검정(paired t test)**으로 기대값과 측정값의 유의미한 차이를 검정 CV, pH, 기대값 대비 차이의 평균과 SD는 모두 복제 샘플이 존재하는 경우에 계산
결과 요약 – 샘플 수집총 127개 샘플(주사제 87개, 경구제 40개) 수집 및 분석 브랜드 수는 총 30개이며, 모두 GS-441524 및 렘데시비르 함량에 대해 LC-MS/MS 분석 수행 모든 샘플은 기부를 통해 수집되었으며, 제품당 복제 수는 2~9개까지 다양했음 (표 1, 2 참고) 제조 국가 (기부자 보고 기준): 중국: 88개 (69%) 미국: 18개 (14%) 캐나다: 13개 (10%) 말레이시아: 5개 (4%) 폴란드: 1개 (1%) 불명: 2개 (2%)
브랜드 별 이명 (또는 동일 제조사):
Table 2 
복제 샘플 (Replicate samples)복제 샘플이 존재하는 경우, 평균값과 표준편차(SD), 변동계수(CV)로 표시된다. pH와 CV는 모두 기재되어 있으며, CV는 동일 제품의 복제 샘플 간 변동성을 의미하며, 샘플이 3개 이상 있을 때 계산되었다.
Meadow는 Harmony로도 알려져 있으며, Panda는 Maxpaw로도 불린다.
기호 설명:
— : 데이터 없음
CV : 변동계수 (Coefficient of Variation)
N : 복제 샘플 수
* Harmony로도 알려짐
** OM 제조사는 GS 함량을 광고하지 않았음. 1시린지를 체중 5파운드 미만 고양이용으로 권장한 설명과 GS의 권장 용량 5 mg/kg/day를 기준으로 예상 농도를 산출함.
*** Maxpaw로도 알려짐
a–g: 유의미한 차이 존재 (P < 0.05)
GS-441524 및 렘데시비르 함량제조사가 주장한 GS-441524 함량과 LC-MS/MS 측정값을 비교하였다. 렘데시비르 함량도 함께 분석되었다.
총 127개 샘플 모두 GS-441524를 포함하고 있었고, 이 중 3개 샘플(Mutian M3 주사제, Panda 1kg 경구제, Panda 2kg 경구제)은 렘데시비르도 함유하고 있었다. 주사제 87개 샘플 중 83개(95%)는 제조사 표기보다 평균 39 ± 17% (범위: 2%~111%) 더 많은 GS 함량 4개(5%)는 평균 18 ± 8.4% (범위: 7%~26%) 더 낮은 함량 4개 제품은 CureFIP, Mutian, Petronium, Freecat에서 제조 FDA의 현재 기준에 따르면 의약품은 제조 시 유효성분이 표기 농도 대비 95~105% 사이에 있어야 함 → 87개 중 단 2개만 기준 충족 전체 주사제를 기준으로 짝지은 t검정 결과, 실제 농도가 유의미하게 더 높았음 (P < .01)
복제 샘플 25개 중
9개(Aura 20, Bliss, Lucky 15/20, Oscar, Panda 15, Phoenix 15, Seka, Valor) 제품은 실제와 표기 농도 간 유의미한 차이 존재
경구제 (40개 샘플)17개(43%)는 평균 75 ± 91.3% 더 높은 GS 함량 (P < .001) 23개(58%)는 평균 39 ± 20% 더 낮은 GS 함량 (P = .002) 95~105% 허용 오차 내에 있었던 제품은 단 3개 Mutian 제조 5개 제품
(Mutian 100 [2개], Mutian 200 [1], Xraphconn 50 [1], Xraphconn 100 [1]) → 기대치보다 90.5%~326% 더 높은 함량 CureFIP 2.4~4kg, Meadow 12/24/48mg 제품은 라벨에 ‘실제 함량’을 표시했으며, 생체이용률 보정은 하지 않음 CureFIP 2.4~4kg: 81.8% 부족 Meadow 24: 31.4% 부족 (P = .014) Meadow 48: 46.3% 부족 Meadow 12: 70.8% 초과 Phoenix Blue: 기대치보다 유의미하게 높음 (P = .029)
복제 샘플 간 변동성복제 샘플이 존재한 경우: 주사제 25개, 경구제 8개 CV 분석은 3개 이상 샘플이 있는 경우에만 수행됨 주사제 CV 범위: 1.5% ~ 28.2% (n = 8) 허용 가능한 CV는 10% 이하로 설정됨 8개 중 6개 제품이 기준 내에 있음 Phoenix 15 샘플은 n = 9로 표본 크기가 크고 CV 3.5%로 매우 일관됨
렘데시비르 함량Mutian M3: 렘데시비르 10.88 mg/mL, GS-441524는 0.4 mg/mL만 포함 Panda 1kg: GS 18.9 mg/pill, 렘데시비르 5.91 mg 포함 Panda 2kg: 렘데시비르 0.749 mg 포함 제조사 표기와 무관하게 렘데시비르가 검출됨
주사제의 pH평균 pH: 1.30 ± 0.15 (범위: 0.89 ~ 2.59) CureFIP: 표기 pH 1.9 ~ 2.2 → 실제 측정값은 1.07 ~ 1.46 Meadow, Rose: 표기 pH 1.8 → 실제는 Meadow(1.3, 1.11), Rose(1.28) Panda 15: 0.94 vs 1.5로 가장 큰 변동성 Mutian M3: pH 2.59로 가장 높음
토의 (Discussion)127개 모든 샘플에 GS-441524가 포함, 3개 제품에는 렘데시비르도 검출 주사제는 대부분 표기보다 실제 GS 농도가 높았음 경구제는 절반 이상이 기대치보다 낮은 함량 6개 제품은 ‘실제 함량’을 표기했으며, 이 중 5개는 실제가 더 낮았음 → 전체 경향을 반영 이러한 저용량 경구제 사용 시, 재발 및 내성 유발 위험 존재 주사제는 라벨이 mg/mL로 명확하여 이러한 문제는 거의 없음
위험성 및 제도 개선 필요성일부 제품은 “고양이 영양제”, “세럼”, “마스크” 등으로 위장 포장되어 배송 OM 브랜드: 해면 추출물 50mg 포함 Mutian: 비타민 B12 포함, 유효 성분은 MT-0901로 표기됨 (실제는 GS-441524) LC-MS/MS 분석 결과 모든 샘플에서 GS-441524 확인, 해면 추출물이나 B12 등은 검출 불가
주사제 pH 고찰pH 5~7.4에서 수용성 낮음, pH < 1에서 수용성 높음 기존 논문에서 pH 1.5 또는 3~4로 조절한 전례 있음 CureFIP는 동일 희석법 따름 저pH로 인해 주사 시 통증 및 부작용 보고됨 렘데시비르가 포함된 Mutian M3는 pH가 더 높고 덜 고통스러움 → pH와 통증의 연관성 제시됨
결론총 127개 샘플 분석: 30개 비허가 브랜드 포함 주사제는 광고보다 높은 GS-441524 함량 pH는 모두 생리적 pH보다 낮았음 경구제는 함량 차이가 심하고, 복제 샘플 간 변동성도 큼 라벨 혼동, 저함량 제품으로 인해 재발 및 내성 우려 합법적 유통 경로 개발 필요성 강조
보충자료(Supplementary Materials): avmajournals.avma.org
감사의 말(Acknowledgments)
FIP Global CATS 커뮤니티 관리자, 기부자, Dr. Federica Scaletti에게 감사
이해관계 공개 공동 저자 Nicole Jacque는 보고서에 언급된 일부 제품 유통에 관여
연구비 NIH T35 훈련 보조금 T35OD010977 및 Zen By Cat 지원 |
